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荧光定量pcr仪的选购要领

发布时间:2017-09-14 阅读:518

要想购到适合的仪器,首先要清楚仪器的各个组合部分。荧光定量pcr仪主要由温控模块、检测器、光路传导、光源组成。
一、温控模块/Peltier:
    普通的Peltier加热方式具有明显边缘效应,均一性差,是上一代的模块PCR加热技术,正处于被淘汰的边缘。
    目前最好的温控模块:银,在金属中银的导热性能较高,升降温速度快,孔间温度均一性好,边缘效应相应减少金属的热传导系数表: 银 429 >铜 401 > 金 317 >铝 237  >铁 80 >锡 67  > 铅 34.8
另:单一模块升降温速度高并不代表样本升降温速度也高,因此在温控模块升降温速度对比中,最终是要看样本的升降温速度是否快最大升降温速度不等与平均升降温速度。
二、检测器:
    荧光定量pcr仪灵敏度:冷CCD >CCD >光电倍增管 CPM  >光电二极管
     CCD作为荧光信号的接受器,其质量直接决定了仪器的检测灵敏度和稳定性。
     10℃的冷CCD,和常温CCD有着质的区别,在专业光学领域,冷CCD的造价成本至少要比常规CCD高出一倍以上。冷CCD在更低的温度下进行光信号捕捉,能够提供更高的光感灵敏度和更低背景噪音。因此,有的荧光定量PCR能够稳定区分1000和2000拷贝的浓度差异,而有的只能做到区分5000和10000个拷贝数。
三、光路传导:
    光路的传导 光路设计应尽可能有效消除边缘效应,光路设计是否有效消除边缘效应,只有实验才能检验。检验方法:96/384孔板中及四角各布置标准品,看差异。其中     
     a、光源直接照射微孔板上:边缘效应明显
     b、逐孔移动式采光:无边缘效应,但需时常校正 
     c、散射采光:边缘效应较明显,切换光源时需要光源组件移动
四、光源:
    荧光定量pcr仪光强比较:髙强度白光LED > 卤钨灯 >单色LED
    白光LED的亮度约是卤钨灯的3倍左右,单色LED的10倍左右,能够捕捉到更多的荧光信号,是专业光源领域的最新技术代表,2011年开始普遍应用于专业仪器,无论光强、灵敏度与均一性可与上一代氙灯光源媲美,且寿命提升了10倍以上。钨灯灯丝本身存在闪烁不稳定的问题,其激发能量远低于白光LED,事实上,无需高端品牌汽车的旗舰概念车,如丰田雷克萨斯,已经开始使用白光LED作为车头灯。
    寿命比较:髙强度白光LED = 单色LED  >卤钨灯
    白光LED的寿命长达10000小时以上,一般可以使用5-10年左右,基本上超过了一般科研仪器的正常工作寿命,基本终身无需更换光源,而卤钨灯光源基本每2年就要更换一次,费时费力,南方更是不足一年就要更换一次。另:卤钨灯每次运行需要半小时预热,其中累计散发的热量对荧光具有明显的淬灭作用。

    上述,便是荧光定量pcr仪的选购要领,供大家借鉴参考,希望对大家有所帮助。
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